正丁醇部位的分離一向是分離工作中的難點(diǎn),但由于其出新率遠(yuǎn)高于小極性部位,所以還是值得下一番功夫的。
一般來(lái)說(shuō),正丁醇部位往往含有單糖、二糖等小分子糖,多種酚類(lèi)化合物,以及苷類(lèi)化合物,極性較大,在硅膠柱上吸附較多,成點(diǎn)性差,分離效果不好。因此,一般說(shuō)來(lái),對(duì)于正丁醇部位可采取以下方法:
1. 大孔樹(shù)脂柱分段。 水溶后上樣,依次用水,30%、60%、95%乙醇溶液洗脫,分別合并、收集。一般說(shuō)來(lái)目標(biāo)化合物多在60%段,水,30%段多為一些水溶性單糖、二糖及多酚類(lèi)化合物,可以考慮棄去。而95%部分多和乙酸乙酯部位大極性段重疊,可以乙酸乙酯部位合并處理。
2. 反相硅膠分段。 如果正丁醇部位量不是太大,或者課題組有大反相柱,可以考慮用反相柱砍段。本課題組就有一根500g的反相柱,專門(mén)用于砍段,效果比正相柱好了許多。唯一需要提醒注意的是,由于我們一般是用正相硅膠板檢測(cè)化合物分離情況,所以反相柱 砍段后往往各組份在硅膠板上看起來(lái)比較混亂,不如硅膠柱砍段后那么直觀,一定要小心對(duì)比,否則會(huì)越分越亂。
3.正相柱分配色譜層析。 如果正丁醇部位量太大,或者課題組沒(méi)有大的相柱用來(lái)分段,那么可以考慮氯仿:甲醇:水 體系來(lái)砍段。我一般用8:2:1、7:3:1以及6.5:3.5:1依次洗脫,效果不會(huì)很好,但兩到三次反復(fù)上柱后各部分還是可以看得到點(diǎn)的。這時(shí)再會(huì)反相柱細(xì)分,拿十到二十個(gè)點(diǎn)應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題的。